技术简介:
高分辨率熔解曲线(high-resolution melting,HRM)是一种基于单核苷酸熔解温度不同而形成不同形态熔解曲线的基因分析新技术,具有极高的敏感性,可以检测出单个碱基的差异,并且成本较低、速度快、不受检测位点的局限,实现了真正的闭管操作。
应用荧光染料嵌入并结合到双链DNA(dsDNA) 上,通过实时 PCR 技术,实时检测 dsDNA 熔解过程中荧光信号值的变化,就能以生成不同形状熔解曲线的方式将 PCR 产物中存在的差异直观地展示出来。同时,借助于专业性的分析软件就可以对测试群体实现基于不同形状熔解曲线的基因分型或归类。
此方法适用于SNP位点数少,中低数量样品的检测。
实验内容:
1.引物设计与合成
2.目的片段PCR
3.上机扫描
提供材料:
基因组DNA(≥20μl,浓度≥50ng/μl)。需提供目的SNP位点的rs号或该位点上下游各200bp的序列以及突变的类型。
交付结果:
1.完整实验流程报告。
2.每一版分型图及样品对应SNP位点的基因型。